1. 微生物菌种保藏的主要目的是: () 。-|||-2. 获得微生物纯培养的分离方法有: () 。-|||-3. 在菌种保藏工作中,为使微生物处于休眠状态,人为地造成 () 的环境,-|||-其中 () 被认为是目前较好的长期保藏方法。-|||-4. 纯培养是指 () 。-|||-5. 菌种保藏的主要原则是使所保存的菌种 () ,并且 () ,常用的保藏方-|||-法有 () , () 。-|||-6. 普通光学显微镜的分辨率决定于 () ,后者的决定因素有两个: () ,对于-|||-可见光来讲,提高分辨率最常用的介质是 () ,目前所有显微镜中分辨率最高的-|||-是 () 。-|||-7. 在使用油镜观察样本时,要在载玻片上滴加 () 以增加照明度和数值孔径。-|||-8. 平板培养时,培养皿倒置是为了 () 。-|||-9. 使用血球计数板计数时,如果计数室是25个中方格,每个中方格是16个小方格-|||-的,实际计数为每个小方格的酵母菌菌细胞平均数为10个,菌液没有作稀释,请问该菌液每-|||-毫升含有的细胞数是 () 。

本题主要考查微生物学中的菌种保藏原则与方法、纯培养技术、显微镜使用原理以及血球计数板的计算。解题关键在于：

1. 菌种保藏需确保存活、避免污染与变异，常用方法如冷冻干燥；
2. 纯培养需通过特定分离方法（如平板划线法）获得单一群落；
3. 显微镜分辨率由光波波长和数值孔径决定，油镜需用香柏油；
4. 血球计数板计算需结合计数室结构与稀释倍数。

1. 微生物菌种保藏的主要目的

关键点：保藏需保证菌种存活、不污染、不发生遗传变异。答案需包含这三个要点。

2. 获得微生物纯培养的分离方法

关键方法：教材中明确的分离方法包括单细胞挑取法、平板划线法、稀释涂布平板法和稀释混合平板法。

3. 菌种保藏的环境与方法

核心条件：通过干燥、低温、缺氧、避光环境使微生物休眠，冷冻干燥保藏法因结合干燥与低温，成为长期保藏的最优选择。

4. 纯培养的定义

本质：纯培养物由同一细胞的后代组成，不含其他微生物。

5. 菌种保藏原则与方法

原则：存活、不污染；方法：冷冻保藏（如甘油管藏）和干燥保藏（如沙土保藏）。

6. 显微镜分辨率的影响因素

公式：分辨率 $d = \frac{\lambda}{2\sin\alpha}$，其中 $\sin\alpha$ 为数值孔径。香柏油因高折射率（接近玻璃）提升分辨率，隧道扫描显微镜分辨率最高。

7. 油镜使用中的介质

作用：香柏油填充物镜与载玻片间，提高数值孔径和亮度。

8. 平板倒置的原因

目的：防止冷凝水滴落污染培养基，避免干裂。

9. 血球计数板计算

步骤：

1. 计数室结构：25中方格，每中方格16小方格，共400小方格。
2. 实际计数：每小方格10个，总细胞数 $10 \times 400 = 4000$。
3. 体积换算：计数室容积0.1 mm³（即0.1 μL），每毫升（10³ μL）含 $4000 \times \frac{10^3}{0.1} = 400000$ 个。