试诉用卡马斯亮蓝R250来显示细胞微丝骨架的原理及应注意的事项?

本题考查细胞生物学中用考马斯亮蓝R250显示细胞微丝骨架的原理及注意事项相关知识。解题思路是先阐述细胞骨架的组成，再说明用Triton X - 100处理细胞的作用，接着介绍后续固定和染色步骤，从而得出显示细胞微丝骨架的原理；对于注意事项，需明确在实验操作过程中对细胞处理以及固定、染色时间的要求。

原理

细胞骨架是由蛋白质组成的复杂网状结构，可分为微管、微丝和中间纤维。Triton X - 100是一种非离子型表面活性剂，用适当浓度的Triton X - 100处理细胞时，它能够破坏细胞膜的结构，将细胞质膜中和细胞之中的蛋白质和全部脂质抽提出来。然而，细胞骨架系统的蛋白质由于其特殊的结构和性质，不受这种处理的破坏而被保存下来。之后，使用戊二醛对保存下来的细胞骨架进行固定，戊二醛可以使蛋白质发生交联反应，从而将细胞骨架的结构固定住，防止其在后续的处理过程中发生变形或破坏。最后，用考马斯亮蓝R250进行染色，考马斯亮蓝R250是一种常用的蛋白质染料，它能够与细胞骨架中的蛋白质结合，使细胞骨架在光学显微镜下呈现出可见的颜色。这样，我们就可以在光学显微镜下观察到由微丝组成的微丝束呈现出网状结构，这就是细胞骨架。

注意事项

1. 洋葱内表皮细胞在进行处理前必须在pH 6.8的磷酸缓冲液中下沉。这是因为合适的pH值的磷酸缓冲液可以维持细胞的生理环境，保证细胞的正常形态和功能。如果pH值不合适，可能会影响细胞的结构和活性，导致实验结果不准确。
2. 固定、染色时间必须足够。固定时间不足，细胞骨架的结构可能无法被有效固定，在后续的处理过程中容易发生变形或破坏；染色时间不足，考马斯亮蓝R250可能无法充分与细胞骨架中的蛋白质结合，导致染色效果不佳，难以在显微镜下清晰地观察到细胞骨架的结构。