一个四肽,经胰蛋白酶水解得两个片段,一个片段在280nm附近有强的光吸收,并且Pauly反应和坂口-|||-(Sakaguchi)反应(含肌基化合物在碱性次氯酸钠溶液中与 - 萘酚反应产生红色)呈阳性。另一片段-|||-用溴化氰处理释放出一个与市三酮反应呈黄色的氨基酸。写出此四肽的氨基酸序列。

考查要点：本题主要考查对酶解法分析多肽链氨基酸序列的掌握，涉及胰蛋白酶、溴化氰的专一性水解特性，以及相关显色反应的判断。

解题核心思路：

1. 胰蛋白酶专一性水解Lys和Arg的羧基形成的肽键，由此确定四肽中存在Lys或Arg。
2. 280nm光吸收提示含有芳香族氨基酸（如Tyr）；Pauly反应阳性（检测Tyr）和坂口反应阳性（检测Arg的肌基）进一步锁定该片段含Tyr和Arg。
3. 溴化氰专一性断裂Met的羧基形成的肽键，结合市三酮反应阳性（检测α-氨基）推断释放的氨基酸为Met。

破题关键点：

• 根据酶解片段的显色反应反推氨基酸种类。
• 结合酶的专一性确定肽键断裂位置，最终推导四肽序列。

胰蛋白酶水解片段分析

1. 胰蛋白酶作用：水解四肽中Lys或Arg的羧基形成的肽键，生成两个片段。
2. 第一片段特征：
   • 280nm光吸收：含Tyr（芳香环结构）。
   • Pauly反应阳性：含Tyr。
   • 坂口反应阳性：含Arg（肌基反应）。
   • 结论：该片段含Tyr和Arg。

溴化氰处理片段分析

1. 溴化氰作用：专一性断裂Met的羧基形成的肽键。
2. 释放氨基酸特征：
   • 市三酮反应阳性：释放的氨基酸含α-氨基（如Met）。
   • 结论：该片段含Met，且断裂后释放Met。

四肽序列推导

1. 胰蛋白酶断裂点：假设四肽为Tyr-Arg-Met-Pro，胰蛋白酶在Arg羧基形成的肽键处断裂，生成Tyr-Arg和Met-Pro。
2. 溴化氰断裂点：对Met-Pro片段，溴化氰断裂Met羧基形成的肽键，释放Met（含α-氨基），符合市三酮反应结果。